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首頁(yè)-技術(shù)文章-徠卡激光共聚焦顯微鏡能夠檢測(cè)到非常微弱的熒光信號(hào)

徠卡激光共聚焦顯微鏡能夠檢測(cè)到非常微弱的熒光信號(hào)

更新時(shí)間:2025-06-19      點(diǎn)擊次數(shù):51
  徠卡激光共聚焦顯微鏡能夠獲得比普通光學(xué)顯微鏡更高的分辨率,可以清晰地觀察到細(xì)胞內(nèi)精細(xì)的結(jié)構(gòu)和微小的病變。例如在神經(jīng)科學(xué)研究中,可以更清楚地看到神經(jīng)元的細(xì)微結(jié)構(gòu)和突觸的形態(tài)。通過(guò)對(duì)樣品進(jìn)行逐層掃描,可以獲得一系列不同深度的光學(xué)切片,重建出樣品的三維結(jié)構(gòu)。這對(duì)于研究生物組織的立體結(jié)構(gòu)、細(xì)胞間的空間關(guān)系等具有重要意義,比如在胚胎發(fā)育研究中觀察器官形成的三維過(guò)程。
 
  能夠檢測(cè)到非常微弱的熒光信號(hào),對(duì)于低表達(dá)水平的熒光標(biāo)記樣本也能有很好的成像效果,有助于發(fā)現(xiàn)一些難以察覺(jué)的生物分子和細(xì)胞活動(dòng)。可以在不破壞細(xì)胞活性的情況下,對(duì)活細(xì)胞進(jìn)行長(zhǎng)時(shí)間的動(dòng)態(tài)觀察,實(shí)時(shí)記錄細(xì)胞內(nèi)的各種生理過(guò)程,如細(xì)胞分裂、物質(zhì)運(yùn)輸?shù)龋瑸檠芯考?xì)胞的生命活動(dòng)提供了有力工具。可以同時(shí)對(duì)多個(gè)熒光標(biāo)記的樣本進(jìn)行成像,方便研究不同物質(zhì)或結(jié)構(gòu)在同一細(xì)胞或組織中的分布和相互關(guān)系,例如在免疫熒光實(shí)驗(yàn)中同時(shí)觀察多種抗原的表達(dá)情況。
徠卡激光共聚焦顯微鏡
 
  徠卡激光共聚焦顯微鏡的基本工作原理:
 
  -點(diǎn)光源照射:以激光作為光源,激光束通過(guò)照明針孔,形成直徑小的點(diǎn)光源。這個(gè)點(diǎn)光源經(jīng)過(guò)透鏡系統(tǒng)后,準(zhǔn)確地聚焦在樣品焦平面上的某一個(gè)微小點(diǎn)上。由于激光具有高度的方向性和相干性,能夠提供高強(qiáng)度、高穩(wěn)定性的照明,為后續(xù)的成像奠定了基礎(chǔ)。
 
  -逐點(diǎn)掃描:在點(diǎn)光源聚焦于樣品焦平面上的某一點(diǎn)后,開(kāi)始進(jìn)行逐點(diǎn)掃描。通過(guò)精密的掃描裝置,控制激光束在樣品焦平面上按照一定的規(guī)律進(jìn)行移動(dòng),依次對(duì)焦平面上的各個(gè)點(diǎn)進(jìn)行照射。每一次照射都只激發(fā)樣品焦平面上一個(gè)小區(qū)域內(nèi)的熒光物質(zhì),使其發(fā)出熒光。
 
  -點(diǎn)探測(cè)成像:被激光激發(fā)的熒光會(huì)向各個(gè)方向傳播,其中一部分熒光會(huì)沿著原路返回,通過(guò)透鏡系統(tǒng)再次到達(dá)探測(cè)針孔。由于只有焦平面上的點(diǎn)發(fā)出的熒光能夠準(zhǔn)確地通過(guò)探測(cè)針孔,而焦平面以外的雜散光則會(huì)被探測(cè)針孔阻擋在外,因此大大提高了成像的對(duì)比度和清晰度。穿過(guò)探測(cè)針孔的熒光被光電倍增管等高性能探測(cè)器接收,并將其轉(zhuǎn)換為電信號(hào)。這些電信號(hào)經(jīng)過(guò)放大、處理后,被傳送到計(jì)算機(jī)中進(jìn)行進(jìn)一步的分析和處理,形成清晰的共聚焦圖像。
 

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